1 適用範圍：

可用於各類食品及原料中菌落總數的測定。也可（kě）用於與食品接觸的容器（qì）、操作台和其他設（shè）備表麵的衛生檢（jiǎn）測。

2 方法原理（lǐ）：

將營養培養基、凝膠和（hé）氯化三苯基四氮唑（TTC）顯色（sè）劑等（děng）加載在試紙片，經加樣、培（péi）養後，細菌菌落在測試（shì）片上顯現出紅色菌斑，通過計數報告結果。

3 操作方法

（1）樣品（pǐn）處理：無菌稱取樣品25g（或（huò）25mL）放入含有225mL無菌生理鹽水（shuǐ）的采樣瓶或均質杯內，經充分振搖（均質）做成（chéng）1:10的稀釋液。用（yòng）1mL滅菌吸管吸取1:10稀釋液1mL，注入含有9mL滅菌生理鹽水的試管內，用1mL滅（miè）菌吸管反（fǎn）複吸吹製成1:100的稀（xī）釋液。以此類推，做出1:1000等（děng）稀釋度的（de）稀釋液，每個稀釋度更換一支滅菌吸管。

（2）接種：一般（bān）食品選2～3個稀釋（shì）度進行檢測，含菌量少的液體樣品（如食用（yòng）純水和礦泉水等）可直接用（yòng）原液檢測。將測試片放在水平台麵上，揭開上麵的（de）透（tòu）明薄膜，用滅菌吸管吸取樣品原液或稀釋液1mL，均勻（yún）加（jiā）到中央（yāng）的紙片上，輕輕將上蓋膜放下，靜置5 min使培養基凝固（gù），非常後（hòu）用手輕輕地壓一下（xià）。每個稀釋度接種兩片。

（3）培養：將測試片（piàn）疊在一起放回原自封袋（dài）中，透明麵朝上水平置於恒溫培養箱內，堆（duī）疊（dié）片數不超過12片（piàn）。培養（yǎng）溫（wēn）度為36℃±1℃，培養15～24h。

4 結果判斷與計數：

（1）細菌在紙片上生長後會顯示（shì）紅色斑點，選擇菌落數適中（10個～100個）的紙片進行計數（shù），乘以稀釋倍數後即為每克（或毫升（shēng））樣品中所含的細（xì）菌菌落總數。菌落數在100以內時，按實（shí）有數報告。大（dà）於100時，用二位有效數字，二位有效數（shù）字後麵的數字，以四舍五入方法計算（suàn），並以10的指數來表示（shì）。

（2）計數原則與報告方式

   ①通常選（xuǎn）擇菌落在10個～100個之間的紙片進（jìn）行計數，乘以稀釋倍數報告之（見下表中例次1）。國家標準菌落總數（shù）報告（gào）方式術語為cfu/g或mL，cfu的含義為菌落形成單位。

   ②若有兩個稀釋度的菌落數（shù）在10個（gè）～100個之內，兩者的（de）比值小於（yú）2，則取其平均（jun1）數（shù），若大（dà）於2，則采（cǎi）用稀釋度小者報（bào）告（見下表中例次2和例次3）。

③若三個稀釋（shì）度的菌落數都有（yǒu）在10個～100個之內時，應選（xuǎn）擇二個低數值的平均數（見下表中例次4）

④若三個稀釋度的菌落數均小於10個或大於100個時，應重新試用更低或更高的稀釋度進行菌落計數；或采（cǎi）用均小於數量標準的非常小值，或采用均大於數（shù）量標準的非常大值（見下表中例次（cì）5和例次6）。

5 表麵取樣方法：

加1mL滅菌生理鹽水（shuǐ）在測試片上，靜置至少1h使培養（yǎng）基凝固；提起上層膜，使（shǐ）中央濾紙部分貼到待測物表麵，用手在外側輕壓；然後將上蓋膜合上，置（zhì）培養箱內培養。

6 注意事項：

使用過的紙片上帶（dài）有活菌，需及時按照生物（wù）安全廢棄物處理原則（zé）進行處理。

菌落數（shù）少時的（de）情況菌落數多時（shí）的情況